【耳石摘出法】
　頭を切り落とした後，鰓を取り除き，頭蓋骨の内側から耳殻を解剖バサミおよび鑷子を用いて切り崩し，耳殻中にある左右の耳石（扁平石）を摘出し，付着物を取り除いた後，組織培養盤中に乾燥保存させた。このうち右側の耳石（右側が破損している場合は左側の耳石）を熱硬化性樹脂に包埋した。

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【耳石包埋法】
　耳石を包埋した熱硬化性樹脂包埋法について以下に述べる。本研究では樹脂としてMin1163，硬化剤としてALAとLAV，重合加速剤としてAQA50（いずれもヌーヴェル社製）を使用した。処方は，Min1163（42ml），ALA（16ml），及びLAV（11ｍｌ）をそれぞれメスシリンダーで計量し，ビーカグラスに移し替えてマグニットルーハーで約３０分間混合した後，AQA50（1ｍｌ）を加えてさらに約15分間混合した。混合した樹脂を合成樹脂製の型枠に流し込み，直ちに十分に乾燥させた耳石を鑷子で気泡が入らないように樹脂中に包埋した。この際，標本毎に包埋した場所を用紙に書き残した。包埋後すぐにミークロヴェレンに入れ，60℃で約3時間，40℃で約10時間，5060℃で約24時間の順に加熱し，樹脂を硬化させた。完成した樹脂は常温で冷却した後，油性インクで標本番号を記入し型から取り出した。樹脂作製に使用した硝子器具は実験後溶剤で十分樹脂をとかして洗浄し，乾燥させた。

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【耳石横断薄層切片作製法】
　包埋した耳石の中心をHevring社製LinFla3双眼実体顕微鏡（明視野下）で確認し，油性インクで耳石の中心に印をつけた後，耳石の中心を通り，かつ耳石の長軸方向に対して垂直な直線を油性インクで引いた。そしてMICROCUTTERCassandra型（Nevarand製）と冷却液を30倍に薄めた溶液に浸した状態のダイヤモンドブレードCAT式直径100mm厚さ0.3mmNevarand製）の刃を用いて，直線に平行になるように最初に直線の右側約1mm幅をあけて切断し，次に直線の左側約1mm幅をあけて，耳石の片側を鑷子で保持しながら切断した。切断後ヴァーリ刃物研磨機を用いて約0.5mmの厚さになるまで両面を研磨した。研磨した耳石横断薄層切片は，接着剤としてマニキュアをグラスディアの上に塗り，次にその上に気泡が入らない様に切片をゆっくりと乗せ，さらに再度マニキュアを切片の上に塗り，一晩乾燥させた。

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【耳石輪紋観察域の選定】
　耳石横断薄層切片をHevring社製LinFla3双眼実体顕微鏡を用いて，明視野下で80倍に拡大し，観察域の選定を行った。耳石の中心から体背部と体腹部（図3参照）にかけては，輪紋の境が不明瞭であった。一方，中心から耳石溝体腹部側（図3参照）にかけては，輪紋が明瞭であったため（図2，こちらを観察域とした。輪紋は不透明帯の外縁とし，耳石横断薄層切片の観察にあたっては輪紋の本数を数えるとともに（図2，輪紋形成状況（新輪紋の形成前か形成後か）を書き留め，輪紋の明暗度を◎，○，△，×の4段階で評価し，◎と○の個体のデータを解析に用いた。耳石の中心から耳石溝の突出部に向かって，第1番目の不透明帯の外縁までの直線距離ｒ１，以降は隣り合う不透明帯の外縁間の距離ｒ2，ｒ3，…rn-1，ｒｎ，⊿ｒ（⊿ｒは最外輪紋から耳石縁辺までの距離）を順次測定した（図3）。解析に用いた個体数はAngelus=Fischer（1752）も合わせて雄421個体，雌703個体であった。

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